Técnicas de laboratorio para determinar la infecciosidad

Autores:

Lucía García San Miguel.

Centro de Coordinación de Alertas y Emergencias Sanitarias, Ministerio de Sanidad.

Agustín Portela Moreira.

Jefe del Servicio de Biotecnología, Departamento de Medicamentos de Uso Humano de la AEMPS.

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El nuevo paradigma de la enfermedad Covid-19 es encontrar un equilibrio entre el control de la transmisión y la reducción de los periodos de aislamiento de casos. Para ello se intenta aproximar la delimitación del periodo de infecciosidad con diferentes herramientas. El uso exclusivo de la PCR resulta ineficiente, al no discriminar entre la detección de virus viable y los fragmentos de RNA viral que se excretan de forma prolongada en los infectados. El crecimiento del virus en cultivo celular se considera una buena aproximación a la viabilidad del virus y, por tanto, a su capacidad de infectar a otra persona, pero es costoso de realizar y no sería pues una buena herramienta diagnóstica de uso rutinario. La carga viral ha demostrado en diferentes estudios correlación con el crecimiento del virus en cultivo celular y podría servir para determinar la capacidad infectiva del virus.

Se presentan dos estudios en la fase previa a su publicación que muestran resultados similares a los ya publicados, con un mayor número de casos y que añaden grupos comparativos entre hospitalizados y no hospitalizados.

Replicación persistente de SARS-CoV-2 en Covid-19 grave⁽¹⁾.

Estudio realizado en el hospital 12 de Octubre de Madrid con 105 pacientes: 50 leves (no hospitalizados) y 55 hospitalizados con neumonía grave. Las muestras se tomaron en diferentes momentos del seguimiento, realizando PCR con carga viral (número de ciclos, Ct) y cultivo.

En los casos leves se consiguió cultivar el virus en el 70,8% de los casos en la primera semana, con un máximo de 10 días. En los casos graves, el virus fue viable en un 56%, 60%, 60% y 33, 3% en la 1ª, 2ª, 3ª y más allá de la 3ª semana, respectivamente, siendo el día 32 el último en el que se logró recuperar de un cultivo. Por debajo de 25 ciclos (carga viral alta), en el 90% el virus fue viable en el cultivo. Por encima de 26 ciclos, en el 47,8 y 18,4 % de hospitalizados y no hospitalizados aún era viable. En los casos no hospitalizados, más allá de los 10 días no se observa ningún caso con CT<30 ciclos (figura 1).

Figura 1: Carga viral (Ct value) en casos leves (azul) y graves (rojo) a lo largo del tiempo desde el inicio de los síntomas.

Propagación de virus infecciosos en pacientes hospitalizados con enfermedad por coronavirus-2019 (Covid-19): duración y determinantes clave.

Se estudian 129 pacientes hospitalizados: 89 de UCI y 40 de agudos. Se detectó virus viable en el 17,8% de los casos, y la duración mediana de la detección de virus viable fue de 8 días (IQR 5-11). Se detectaron anticuerpos neutralizantes en el 100% de los casos. La probabilidad de detectar virus viables descendió a <5% en los siguientes casos: por encima de los 15 días tras el inicio de los síntomas (IC 95% 13,4-17,2) (figura 2), por debajo de 6,6 log₁₀ de carga de RNA viral (figura 3) o con un título de anticuerpos neutralizantes >1:80 (figura 4).

Figura 2: Probabilidad de obtener virus viable en un cultivo celular en relación a los días trascurridos desde el inicio de síntomas en pacientes hospitalizados.

Figura 3: Probabilidad de obtener virus viable en un cultivo celular en relación con la carga viral de RNA detectada mediante PCR en muestras respiratorias en pacientes hospitalizados.

Figura 4: Probabilidad de obtener virus viable en un cultivo celular en relación con los títulos de anticuerpos neutralizantes en pacientes hospitalizados.

BIBLIOGRAFÍA:

1. medRxiv. Maria Dolores Folgueira, Joanna Luczkowiak, Fatima Lasala, Alfredo Perez-Rivilla, Rafael Delgado. Persistent SARS-CoV-2 replication in severe COVID-19. 12.06.2020. Disponible en: https://www.medrxiv.org/content/10.1101/2020.06.10.20127837v1 (aviso: este artículo es ahead of print; no ha sido revisado por pares y desde la plataforma donde está publicado se recomienda no tomar decisiones clínicas basadas en estos resultados)
2. medRxiv. Jeroen J.A. van Kampen et al. Shedding of infectious virus in hospitalized patients with coronavirus disease-2019 (COVID-19): duration and key determinants. 9.06.2020. Disponible en: https://www.medrxiv.org/content/10.1101/2020.06.08.20125310v1.full.pdf (aviso: este artículo es ahead of print; no ha sido revisado por pares y desde la plataforma donde está publicado se recomienda no tomar decisiones clínicas basadas en estos resultados)